FluoroDOT assay images

Un método novedoso para visualizar la secreción celular como nunca antes

Las proteínas secretadas median procesos fisiológicos esenciales. Comprender la dinámica espacial y temporal de la secreción de proteínas a nivel de una sola célula es esencial para comprender numerosos sistemas biológicos relevantes para la salud y la enfermedad. Sin embargo, los métodos actualmente disponibles para estudiar la secreción de proteínas a nivel de una sola célula carecen de resolución espacial.

Por lo tanto, los científicos de la Universidad de Washington en St. Louis idearon un enfoque para visualizar las proteínas secretadas por las células con una resolución sorprendente. Desarrollaron el ensayo FluoroDOT para ver y medir las proteínas secretadas por una sola célula en aproximadamente 30 minutos.

Cuando se prueba, se encuentra que el ensayo FluoroDOT es versátil, de bajo costo y adaptable a cualquier entorno de laboratorio. Además, potencialmente puede ofrecer una visión más completa de estas proteínas que los ensayos existentes ampliamente utilizados.

Los métodos existentes tienen una sensibilidad limitada y pueden tardar hasta 24 horas en procesarse. El método novedoso es diferente de esos métodos, ya que utiliza un flúor plasmónico, una nanoetiqueta mejorada con plasmón desarrollada en el laboratorio de Singamaneni que es 16 000 veces más brillante que las etiquetas de fluorescencia convencionales y tiene una relación señal-ruido casi 30 veces mayor.

Srikanth Singamaneni, Profesor Lilyan & E. Lisle Hughes de Ingeniería Mecánica y Ciencia de los Materiales en la Escuela de Ingeniería McKelvey, dijo: “Los pisos plasmónicos están compuestos de nanopartículas metálicas que sirven como antena para atraer la luz y mejorar la emisión de fluorescencia de los fluoróforos moleculares, lo que las convierte en nanopartículas ultrabrillantes”.

Las harinas plasmónicas tienen una emisión ultrabrillante que permite secretar cantidades extremadamente pequeñas de proteína, lo que no pueden hacer en los ensayos existentes. El uso de un algoritmo personalizado también permite cuantificar digitalmente las señales de alta resolución utilizando la cantidad de partículas, o patrón de puntos, por grupo o punto.

Anushree Seth, ex becaria postdoctoral en el laboratorio de Singamaneni, dijo: “Usando un microscopio de fluorescencia simple, podemos visualizar simultáneamente una célula junto con la distribución espacial de las proteínas secretadas a su alrededor. Vimos patrones de secreción interesantes para diferentes tipos de células. Este ensayo también permite la visualización simultánea de dos tipos de proteínas de células individuales. Cuando las células múltiples están sujetas a los mismos estímulos, podemos distinguir las células que secretan dos proteínas simultáneamente de las que solo secretan una proteína o no secretan ninguna”.

Los científicos validaron su método utilizando proteínas secretadas por células humanas y de ratón, incluidas células inmunitarias infectadas con Mycobacterium tuberculosis.

Philips dijo, “Cuando Mycobacterium tuberculosis infecta las células inmunitarias, esas células responden secretando proteínas inmunitarias importantes, llamadas citocinas. Pero no todas las células responden a la infección de la misma manera. El ensayo FluoroDOT nos permitió ver cómo las células individuales de una población responden a la infección, para ver qué células secretan y en qué dirección. Esto no era posible con la tecnología más antigua”.

Referencia de la revista:

  1. Anushree Seth, Ekansh Mitta, et al. Imágenes de alta resolución de la secreción de proteínas a nivel de una sola célula mediante el ensayo FluoroDOT mejorado con plasmón. Cell Reports Methods, agosto de 2022. DOI: 10.1016/j.crmeth.2022.100267


#método #novedoso #para #visualizar #secreción #celular #como #nunca #antes

Dejá un comentario

Tu dirección de correo electrónico no será publicada.